雅安藏茶从属于四川边茶，主销西藏等边疆地区，边疆少数民族有“宁可三日无食，不可一日无茶”的说法，可见，四川边茶在边疆少数民族生活中的重要地位。姜波等研究表明，贮存有一定时期的四川边茶其抑制脂肪酸合酶活性的效果随着贮存时间的延长而不断增加，说明贮存过程会影响藏茶的品质。而贮存过程中品质的变化也与微生物的种群有一定的关系，研究藏茶贮存过程中的真菌微生物种群，对藏茶贮存方法的改进及品质提高具有重要意义。因此，本试验对藏茶进行了贮存过程中的真菌分类学地位鉴定，以期为藏茶贮存过程中品质变化的机理提供生物学方面的理论参考，为贮存时期安全保存及促进品质的转化提供理论依据。
1、材料与方法
1．1材料藏茶由四川雅安市茶叶有限公司提供。
1．2试验方法1．2．I培养基的配制参照《微生物学实验手册》进行马丁(Martin)孟加拉红链霉素琼脂培养基的配制。
1．2．2真菌的分离纯化1)微生物菌悬液梯度的制备参照按GB／T4789．2—2o03《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》l5进行；2)微生物的分离培养采用马丁(Martin)孟加拉红链霉素琼脂培养基37℃下黑暗培养，采用平板涂布法；3)微生物的纯化培养参照《中国真菌志》[6的标准培养法：察贝克琼脂培养基(cYA)25。C下黑暗培养7d。1．2．3真菌的分类鉴定按照《微生物学实验手册》《中国真菌志》。和《真菌鉴定手册》进行真菌鉴定。
2、结果与分析
通过对雅安藏茶贮存过程中存在的真菌种群进行分类学地位鉴定，共发现1类曲霉菌、3类青霉菌及1类根霉菌。其中，曲霉菌是藏茶中的优势类群。2．1曲霉菌(Aspergillusniger)黑曲霉是一种低等真核生物，属于半知菌亚门(Deuteromyeotina)、丝孢纲(Hyphomycetes)、丝孢目(Hyphomycetales)、丛梗孢科(Moniliaceae)、曲霉属(Aspergillus)，是世界公认的安全可食用性菌种，在工业生产和学术研究中占有重要的地位。作为参与藏茶贮存过程中品质形成的重要菌种，足藏茶贮藏过程中数量最多的一类微生物，研究其生命周期及其代谢产物变化有着重要意义。从藏茶贮存过程中分离的黑曲霉形态结构(图1)看出，黑曲霉的菌落在cYA(察贝克琼脂培养基)上生长迅速，25C下培养7d后，直径为50～70mm，少数菌株生长较局限，多数生长较快，菌落平坦或中心稍凸起，有规则或不规则的辐射状沟纹，质地丝绒状或稍呈絮状，有的菌株偶有过度生长现象，产生大量分生孢子，表面呈暗褐黑色至炭黑色；渗出液有或无，无色；具或不具霉味。菌落反面无色或呈不同程度的黄色、黄褐色或带微黄绿色。分生孢子头初为球形至辐射形，分生孢子球形或近球形。较多，分生孢子面的边缘呈现蓝绿色，菌丝体淡灰白色，渗出液缺乏，可溶性色素缺乏。2．2．3巴恩正青霉菌(Baenpenicillium)巴恩正青霉菌形态结构如图4所示，巴恩正青霉菌在CYA上25C培养7d后，直径25～36mm，规则或不规则的放射状皱纹较多或大量产生，中心有或无脐状突起；质地绒状兼絮状和颗粒状；分生孢子结构通常稀少或很少，不影响菌落面的颜色，偶有分离物则较多，分生孢子面暗灰绿色，近于灰橄榄色；菌丝体白色至微黄色或灰白色；闭囊壳大量产生；渗出液大量产生，淡黄色，偶有缺乏者；反面砖红色、橘褐色、黄褐色；可溶性色素缺乏。
2．2青霉菌(Penicillium)青霉属青霉多数种在生活史中只具有无性阶段，仅少数种部分存在有性阶段。藏茶贮存过程中主要有光孢青霉菌、娄地青霉菌和巴恩正青霉菌出现。2．2．1光孢青霉菌(Penicillium glabrum)光孢青霉菌形态结构如图2所示，光孢青霉菌在CYA上25℃培养7d后，直径38～55rnm，具放射状皱纹，质地绒状；分生孢子大量产生，分生孢子面灰绿色，菌丝体白色，偶有分离物产生，可溶性色素缺乏。2．2．2娄地青霉菌(Penicilliu mroqueforti)娄地青霉菌形态结构如图3所示，娄地青霉菌在CYA上25℃培养7d后，直径45～65mlTl，有少量放射状皱纹，中央有脐状突起而其他部分平坦，边缘较薄且不规则；质地绒状，中心有轻微絮状；分生孢子结构2．3根霉菌(Rhizopus)根霉属接合菌亚门(Zygomycotina)、接合菌纲(Zygomycetes)、毛霉目(Mucorales)、毛霉科(Mu—cot)。除细菌以外，根霉是迄今为止丝状菌中产L一乳酸的另一重要菌种。从藏茶贮存过程中分离的菌体显微照相如图5所示。根霉菌产生有性孢子，菌体单细胞或丝状，无隔膜，常多核；无性阶段的孢子为不动的孢囊孢子或与分生孢子相似的孢子囊。腐生，无性孢子主要为生在孢子囊中的孢囊孢子或与分生孢子相似的孢子囊(即毛霉目特征)，不形成子实体；孢子囊相似，都具有囊轴，孢子囊壁薄，孢囊孢子由孢子囊壁破裂后释出(为毛霉科特征)。孢子囊不作烧瓶状，孢子囊都为球形，孢子囊没有中轴基，孢囊梗在假根的对面，从匍匐菌丝生出。
3、小结与讨论
藏茶贮存过程中存在的微生物是一个复杂的体系，各种微生物在生长过程中分泌胞外酶将大分子物质降解成可溶性的小分子物质，并为自身的生长代谢提供氮源、碳源等。1)黑曲霉可产生多种酶类，如果胶酶、葡萄糖淀粉酶、纤维素酶、柚苷酶、单宁酶、葡萄糖氧化酶、糖苷酶等。其中，葡萄糖淀粉酶、纤维素酶和果胶酶，可以分解多糖、脂肪、蛋白质、天然纤维、果胶和水不溶性化合物等有机物。水解产物大多为单糖、氨基酸、水化果胶和可溶性碳水化合物。黑曲霉产生的单宁酶可分解茶叶中的单宁，解除单宁对于后续微生物的抑制起到重要作用，同时纤维素酶、果胶酶等酶类分解茶叶中的高分子碳水化合物，增加藏茶溶出物，对藏茶甘醇品质的形成起关键作用。2)青霉产生多种酶类及有机酸，可生产葡萄糖氧化酶或葡萄糖酸、柠檬酸、柠檬酸霉素和抗坏血酸。且青霉素发酵中的菌丝废料含有丰富的蛋白质、矿物质和B类维生素；产黄青霉代谢产生的青霉素对杂菌、腐败菌可能有良好的消除和抑制生长作用，因此，对藏茶醇和品质的形成可能有辅助作用。3)根霉的淀粉酶、果胶酶活力较高，能产生有机酸，还能产生芳香类物质，也能转化甾醇族化合物的重要菌类。在藏茶中生成一定数量的根霉，有利于藏茶甜香品质的形成。等矿质元素的消耗较大,因此,AM真菌对矿质元素吸收的促进效应有利于牡丹开花。AM真菌对P和Ca的促进效应最重要,这是由于我国农田土壤中有效磷浓度低,而Ca可显著促进牡丹的光合作用,AM真菌改善植物矿质元素营养的作用已得到广泛认可,尤其是P元素,AM真菌改善植物P营养的效应是AM真菌与植物共生关系中最重要的基础,也是AM真菌所具有的各种作用中最显著和稳定的,其他矿质元素对菌根植物的效应或机理的研究还不够全面或稳定本研究使用的是混合菌剂,研究表明,接种混合菌剂比单一菌剂对幼苗促进效果更显著,而且可以扩大其应用范围。牡丹作为观花植物,AM真菌对其开花的促进效应为重要,由于牡丹为多年生木本植物,AM直菌对其开花的影响研究周期较长,因此,有待对AM菌对牡丹开花的直接效应以及不同菌种之间的差异作进一步研究。
出处：《贵州农业科学》2010年38卷
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